46.關於Sanger sequencing的敘述，下列何者最不適當？
(A)原理是雙去氧核苷酸鏈中止法（dideoxynucleotide chain termination）
(B)所使用的核苷酸包括雙去氧核苷酸與去氧核苷酸
(C)可以用四種螢光分別標定不同的雙去氧核苷酸
(D)定序引子應設計在變異點前5 bp左右，以利判讀

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統計： A(98), B(190), C(167), D(1019), E(0) #3131923

詳解 (共 3 筆)

#5896285
定序引子應設計在變異點前至少50-60 bp左右。
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#6007091


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#7283019

Sanger sequencing（桑格定序）：


1. 原理
鏈終止法（chain termination）：在 DNA 合成過程中加入 ddNTP（dideoxynucleotide），一旦 ddNTP 被加入，DNA 聚合就停止延伸。
與普通 dNTP 一起混合，會生成不同長度的片段。

2. 核苷酸使用
dNTP（正常去氧核苷酸）：用於 DNA 合成
ddNTP（雙去氧核苷酸）：終止 DNA 連鎖

3. 螢光標記
現代 Sanger 多使用 四種不同螢光標記 ddNTP，可同時在一條反應管中完成

4. 定序引子設計
引子應與欲定序的序列高度互補
一般設計原則：引子通常 位於目標序列上游 50-60 bp
變異點前5 bp左右 是不正確的，因為太靠近變異點可能影響延伸效率，影響峰型判讀
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