72.下列那一個分子檢驗技術最適合評估與檢測腫瘤突變負荷（tumor mutation burden）？
(A)桑格定序法（Sanger sequencing）
(B)即時定量聚合酶連鎖反應（real-time qPCR）
(C)次世代定序（next-generation sequencing, NGS）
(D)數位化聚合酶連鎖反應（digital PCR）

一、先釐清什麼是 TMB（考前一定要會）

TMB = 單位基因組長度內的體細胞突變數量
? 通常以 mutations / Mb 表示

✔ 需要 同時偵測大量基因、甚至全外顯子
✔ 不是看單一突變，而是「突變總量」

二、逐一解析選項（為什麼只有一個對）

? (A) 桑格定序（Sanger sequencing） ❌

• 一次只能看 單一基因或短片段

• 靈敏度低、通量低

• 無法計算整體突變負荷

? ❌ 不適合 TMB

? (B) 即時定量 PCR（real-time qPCR） ❌

• 只能針對 已知特定突變

• 適合「有沒有」、「多少拷貝」

• 無法同時掃描大量突變

? ❌ 不適合 TMB

? (C) 次世代定序（NGS） ✅【正確答案】

為什麼 NGS 最適合 TMB？

✔ 可同時分析 數百～數千個基因
✔ 可做：

• 全外顯子定序（WES）

• 大型標靶基因定序（TMB panel）
  ✔ 能統計：

每 Mb 出現多少體細胞突變

? 這正是 TMB 的定義

? 臨床上（如免疫治療用藥判斷）：

• TMB-high = 對免疫檢查點抑制劑反應較好

? (D) 數位化 PCR（digital PCR） ❌

• 超高靈敏度

• 適合：

  • 極低頻突變

  • MRD（微小殘留疾病）

• 但一次只能看 極少數突變

? ❌ 不適合計算「突變總量」