1.若要分離 Pro-Ser-Val-Ala-Ile 與 Asn-Ala-Thr-Ser-Pro 兩條胜肽（peptide），使用下列那種方法最為合適？
(A)size-exclusion chromatography
(B)ion-exchange chromatography
(C)Affinity chromatography
(D)reversed-phase liquid chromatography

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統計： A(60), B(236), C(248), D(506), E(0) #3282001

詳解 (共 3 筆)

#6216454
Pro-Ser-Val-Ala-Ile ...

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1.若要分離 Pro-Ser-Val-...
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答案

(D) reversed-phase liquid chromatography（反相液相層析, RP-LC/RP-HPLC）

逐一說明（專業解析）

方法 分離原理 對本題是否合適 理由重點
(A) Size-exclusion chromatography（體積排阻） 依分子大小（水合半徑）分離 不合適 兩條胜肽皆為五胜肽，分子量與體積極為接近，難以有效分開。
(B) Ion-exchange chromatography（離子交換） 依淨電荷/等電點分離 通常不合適 序列中幾乎無帶電側鏈（無 Lys/Arg/Asp/Glu/His），主要只有末端電荷；兩者在多數 pH 條件下淨電荷皆近於 0，解析度差。
(C) Affinity chromatography（親和層析） 目標分子與配體特異性結合 不合適 需已知且專一的親和配體（如標籤或特定結合域）；一般分離未知/常規短胜肽時不實用。
(D) Reversed-phase LC（反相層析） 依疏水性強弱（在疏水固定相上的保留）分離 最合適 兩序列疏水性差異大：Pro-Ser-Val-Ala-Ile較疏水；Asn-Ala-Thr-Ser-Pro較親水。反相 C18 欄常可清楚拉開保留時間。

為何選 D（反相層析）的關鍵理由

  1. 疏水性差異明顯：

    • Peptide 1：Pro-Ser-Val-Ala-Ile → 含兩個強疏水性胺基酸（Val、Ile），整體更疏水，保留時間較長。

    • Peptide 2：Asn-Ala-Thr-Ser-Pro → 含多個極性殘基（Asn、Thr、Ser），更親水，較早流出。

  2. RP-LC 是分離胜肽的常規首選：以 C18 固定相、以水/有機溶劑（如乙腈）梯度、加少量酸（如 TFA 或甲酸）作流動相，對短胜肽具有高解析度與重現性。

  3. 其他方法的限制：大小近似使 SEC 無力；缺乏顯著電荷差導致 IEX 難以分離；無特異配體時親和層析不適用。

方便記憶的小撇步

  • 「短肽看疏水 → 反相最對味」：分子量相近、帶電殘基少時，先想到 RP-LC。

  • 「大小差很大才用 SEC；電荷差很大才用 IEX；有專一抓手才用 Affinity」。

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